标记蛋白HPT的表达、纯化及免疫活性鉴定

doi:10.7525/j.issn.1673-5102.2011.01.010

植物研究 ›› 2011, Vol. 31 ›› Issue (1): 56-60.doi: 10.7525/j.issn.1673-5102.2011.01.010

标记蛋白HPT的表达、纯化及免疫活性鉴定

高彬^1,2;张海燕²;范海^1*

1.山东师范大学逆境植物重点实验室，济南　250014；2.中国科学院植物研究所，北京　100093

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-01-20 发布日期:2011-01-20
通讯作者: 范海
基金资助:

Expression,Purification and Immunoreactivity of Hygromycin-B-Phosphotransferase

GAO Bin;ZHANG Hai-Yan;FAN Hai*

1.Key Laboratory of Plant Stress,Shangdong Normal University,Jinan　250014；2.Institute of Botany,the Chinese Academy of Sciences,Beijing　100093

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2011-01-20 Published:2011-01-20
Contact: FAN Hai
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摘要/Abstract

摘要： 构建含有HPT的原核表达质粒，经诱导表达纯化后获得HPT抗体。从含有hpt的质粒pCambia1301上扩增目的基因，经SalⅠ和NotⅠ双酶切后与原核表达载体pET-28b（+）进行粘性末端连接，成功构建了pET-28b-hpt质粒，并转化到宿主细菌大肠杆菌Rosset(DE3)中进行蛋白表达。在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,pET-28b-hpt原核表达载体在E.coli Rosset菌株中以包涵体的形式高效表达了HPT蛋白，并以纯化的目的蛋白为抗原免疫兔制备了多克隆抗体。利用本方法可以获得特异性强、灵敏度高的多克隆抗体。

关键词: 潮霉素磷酸转移酶, 原核表达, 重组蛋白, 多克隆抗体

Abstract: The prokaryotic expression plasmid of hygromycin-B-phosphotransferase(HPT) was constructed. The hpt gene was cloned by PCR. It was digested by SalⅠ/NotⅠand subcloned into expression vector pET-28b(+). pET-28b-hpt was transferred into E. coli Rosset; fusion protein was induced by isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG) and analyzed by SDS-PAGE. The most products existed in an inclusion body form. The HPT protein purified by Ni²⁺-NTA column was used to immunize New Zealand rabbits. The HPT polyclonal antibodies reveal high sensitivity and specificity.

Key words: hygromycin-B-phosphotransferas, prokaryotic expression, recombinant protein, polyclonal antibodies

中图分类号:

Q785

高彬;张海燕;范海*. 标记蛋白HPT的表达、纯化及免疫活性鉴定[J]. 植物研究, 2011, 31(1): 56-60.

GAO Bin;ZHANG Hai-Yan;FAN Hai*. Expression,Purification and Immunoreactivity of Hygromycin-B-Phosphotransferase[J]. Bulletin of Botanical Research, 2011, 31(1): 56-60.

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标记蛋白HPT的表达、纯化及免疫活性鉴定

Expression,Purification and Immunoreactivity of Hygromycin-B-Phosphotransferase

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