植物研究 ›› 2009, Vol. 29 ›› Issue (2): 234-241.doi: 10.7525/j.issn.1673-5102.2009.02.019
郑道君1,2;刘国民1,2*;梁远发3;鄢东海3;令狐昌弟3;田永辉3
ZHENG Dao-Jun;LIU Guo-Min;*;LIANG Yuan-Fa;YAN Dong-Hai;LINGHU Chang-Di;TIANG Yong-Hui
摘要: 系统地研究了中国木犀科苦丁茶ISSR反应体系中的主要影响因子,建立了一套稳定的ISSRPCR反应参数。筛选出了10个有效引物,并以中国木犀科苦丁茶8个物种共21份种质材料为供试材料对优化后的反应条件的重复性、多态性进行了检测。优化后的反应体系为:10×buffer 2.5 μL,2.0~3.0 mmol·L-1 MgCl2,150~300 μmol·L-1 dNTPs,Taq酶1.0~1.5 U,引物0.4~0.5 μmol·L-1,DNA模板5~320 ng。PCR扩增程序为:94℃预变性4 min,然后按94℃变性40 s,50~54℃退火45 s,72℃延伸120 s,进行35个循环,最后72℃延伸8 min。该反应条件可应用于中国木犀科苦丁茶亲缘关系和遗传多样性分析。
中图分类号: