RAPD影响因素的研究及实验条件的优化进

植物研究 ›› 1999, Vol. 19 ›› Issue (2): 75-80.

RAPD影响因素的研究及实验条件的优化进

夏铭, 栾非时, 李景鹏

东北农业大学, 哈尔滨 150030

收稿日期:1998-04-10 出版日期:1999-06-15 发布日期:2016-06-14

STUDY ON INFLUENCING FACTORS OF RAPD AND OPTIMIZATION OF RAPD EXPERIMENT CONDITIONS

Xia Ming, Luan Fei-shi, Li Jing-peng

Northeast Agricultural University, Harbin 150030

Received:1998-04-10 Online:1999-06-15 Published:2016-06-14

摘要/Abstract

摘要： 针叶树种红松(Pinus koraiensis)和阔叶树种蒙古栎(Quercus mongolica)为材料,研究了随机扩增多态DNA(RAPD)的影响因素,优化了各种实验条件。RAPD对模板浓度的适应范围比较广,从10~80ng/反应均可得到一致的结果;dNTP的适宜浓度为150~300mmol/L;TaqDNA聚合酶的用量以1~2U为佳。对于十个碱基的随机引物,合适的复性温度为35~37℃;1min的延伸时间足以满足2kb以下的DNA片段的合成;热循环的次数以40次为宜。按照优化的RAPD条件进行的重复实验,重现性良好。

关键词: 随机扩增多态DNA, 影响因素, 实验条件, 优化

Abstract: The influencing factors of RAPD were studied and the experimental parameters were optimized using Korean Pine (Pinus koraiensis) and Mongolian Oak(Quercus mongolica). The optimal experiment conditions are as follow: 20 ul system containing 10~80ng template,150~300mmol/L dNTP, 15ng arbitary primer, 1~2 units Taq DNA polymerase. With a M.J. Thermal Cycler, optimal amplification program is 40 cycles of 1 min at 94℃, 1 min at 35~37℃, 1 min at 72℃, using block control style. A high reproducibility was obtained with the optimized experiment conditions.

Key words: Random Amplified Polymorphic DNA, Influencing factors, Optimization

夏铭, 栾非时, 李景鹏. RAPD影响因素的研究及实验条件的优化进[J]. 植物研究, 1999, 19(2): 75-80.

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