植物研究 ›› 2013, Vol. 33 ›› Issue (2): 238-242.doi: 10.7525/j.issn.1673-5102.2013.02.020
宋江华;赵颖;汪承刚*;张灵凤;张慧
SONG Jiang-Hua;ZHAO Ying;WANG Cheng-Gang*;ZHANG Ling-Feng;ZHANG Hui
摘要: 为获得乌塌菜ISSR-PCR的最佳反应体系,采用单因素浓度梯度试验和正交优化设计相结合的方法,研究了引物浓度、dNTP浓度、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶用量对PCR反应的影响。并在此基础上对退火温度和循环数进一步优化,最终确立了适合乌塌菜ISSRPCR反应的最佳体系和程序。即20 μL PCR反应体系含:30 ng模板DNA,0.50 μmol·L-1引物,0.25 mmol·L-1 dNTP,1 mmol·L-1 Mg2+,1.0 U Taq DNA聚合酶。PCR扩增程序为:94℃预变性3 min;94℃变性30 s,50℃退火1 min,72℃延伸90 s,35个循环;72℃延伸7 min,4℃保存。这一优化的ISSR-PCR反应体系的建立为今后利用ISSR技术对乌塌菜进行种质资源的分类鉴定奠定了基础。
中图分类号: