用基因枪法将GUS基因导入烟草脱外壁花粉及其瞬间表达

植物研究 ›› 1998, Vol. 18 ›› Issue (4): 422-427.

用基因枪法将GUS基因导入烟草脱外壁花粉及其瞬间表达

王劲¹, 施华中¹, 周嫦¹, 杨弘远¹, 张献龙², 章荣德²

1. 武汉大学生命科学学院植物生殖生物学研究室, 武汉 430072;
2. 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室, 武汉 430070

收稿日期:1997-09-04 出版日期:1998-12-15 发布日期:2016-06-14
基金资助:
高等学校博士点专项基金和湖北省自然科学基金资助课题。

TRANSIENT EXPRESSION OF GUS GENE DELIVERED INTO DE-EXINED POLLEN IN NICOTIANA TABACUM BY MICROPROJECTILE BOMBARDMENT

Wang Jin¹, Shi Hua-zhong¹, Zhou Chang¹, Yang Hong-yuan¹, Zhang Xian-long², Zhang Rong-de²

1. College of Life Science, Wuhan University, Wuhan 430072;
2. State Key laboratory of Crop Genetic Improvement, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070

Received:1997-09-04 Online:1998-12-15 Published:2016-06-14

摘要/Abstract

摘要： 以β-葡糖苷酸酶(β-glucuronidase, GUS)基因作为报告基因,用基因枪法将其导入烟草(Nicotiana tabacum L.)脱外壁花粉和作为对照系统的完整花粉,探讨了启动子及不同轰击条件对外源基因瞬间表达的影响,比较了二者的转化频率。结果表明:玉米花粉特异启动子能启动GUS基因在脱外壁花粉和完整花粉中表达,而CaMV35S启动子则不能。靶距离越近,着弹率越高,GUS基因瞬间表达频率越高;当进气压力为900psi(pounds per sq.in.)、靶距为6cm时,脱外壁花粉的瞬间表达频率达最高,为0.45%,约为完整花粉的6倍。表达的蓝色反应花粉经DAPI荧光染色后细胞学观察表明,金粉粒能够打入营养核和生殖核。

关键词: 脱外壁花粉, 基因枪, GUS基因, 瞬间表达, 烟草

Abstract: As a part of our research to develop an alternative system for gene transformation we investigated the possible usage of de-exined pollen(DEP)as a foreign gene vector in comparision with the control intact pollen(IP).Bombardment of β-glucuronidase(GUS)gene controlled by pollen-specific promoter Zml3-260 into the both kinds of pollen of Nicotiana tabacum resulted in transient expression of GUS gene.No activity of CaMV35S promoter was detected in both cases.The results showed that under optimal bombardment conditions, ie.6cm of bombardment distance and 900psi of rupture disk pressure, the frequency of transient GUS gene expression was 0.45% in the DEP, six times higher than the control, indicating that DEP responded much better to foreign gene transfer than IP.Cytological observations on GUS-expressed pollen showed that introduced gold particles were visible in the cytoplasm, vegetative nucleus as were as the generative nucleus.

Key words: De-exined pollen, Gene bombardment, GUS gene, Transient expression, Nicotiana tabacum

王劲, 施华中, 周嫦, 杨弘远, 张献龙, 章荣德. 用基因枪法将GUS基因导入烟草脱外壁花粉及其瞬间表达[J]. 植物研究, 1998, 18(4): 422-427.

Wang Jin, Shi Hua-zhong, Zhou Chang, Yang Hong-yuan, Zhang Xian-long, Zhang Rong-de. TRANSIENT EXPRESSION OF GUS GENE DELIVERED INTO DE-EXINED POLLEN IN NICOTIANA TABACUM BY MICROPROJECTILE BOMBARDMENT[J]. Bulletin of Botanical Research, 1998, 18(4): 422-427.

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