2个北美冬青新品种组培快繁高效再生技术体系的建立

doi:10.7525/j.issn.1673-5102.2021.02.010

植物研究 ›› 2021, Vol. 41 ›› Issue (2): 221-231.doi: 10.7525/j.issn.1673-5102.2021.02.010

2个北美冬青新品种组培快繁高效再生技术体系的建立

刘瑞¹^,², 张嘉仪¹^,², 葛超奇³, 谢露露¹^,², 陈颖¹^,²(), 张粲¹^,², 陈茜¹^,²

^1.南京林业大学南方现代林业协同创新中心，南京 210037
^2.生物与环境学院，南京 210037
^3.南京工业大学2011学院，南京 211816

收稿日期:2020-04-19 出版日期:2021-03-20 发布日期:2021-01-05
通讯作者: 陈颖 E-mail:chynjfu@163.com
作者简介:刘瑞(1997—),女，硕士研究生,主要从事植物逆境生理与生物技术方面的研究。
基金资助:
江苏省科技厅现代农业重点项目(BE2017375);国家林业局948引进先进技术项目(2014-4-61);江苏省高校优势学科建设工程项目;南京林业大学大学生创新训练计划项目(2019NFUSPITP0448)

Establishing an Efficient Regeneration Protocol in vitro for Rapid Micro-propagation of Two New Varieties of Ilex verticillata L.

Rui LIU¹^,², Jia-Yi ZHANG¹^,², Chao-Qi GE³, Lu-Lu XIE¹^,², Ying CHEN¹^,²(), Can ZHANG¹^,², Xi CHEN¹^,²

^1.Collaborative Innovation Center of the Southern Modern Forestry，Nanjing 210037
^2.College of Biology and the Environment，Nanjing Forestry University，Nanjing 210037
^3.College of 2011，Nanjing Tech University，Nanjing 211816

Received:2020-04-19 Online:2021-03-20 Published:2021-01-05
Contact: Ying CHEN E-mail:chynjfu@163.com
About author:LIU Rui(1997—),female,master,major in plant biotechnology and physiology.
Supported by:
Science and Technology Plan Project of Jiangsu Province(BE2017375);948 Project of State Bureau of Forestry of China(2014-4-61);Program for Priority Academic Program Development of Jiangsu Province of China(PAPD);Innovation Training Program for college students of Nanjing Forestry University(2019NFUSPITP0448)

摘要/Abstract

摘要：

以北美冬青（Ilex verticillata L.）“Red Sprite”和“Winter Gold”2个品种的幼嫩枝条为外植体，建立了2个新品种的高效组培再生技术体系，为北美冬青新品种苗木的推广提供技术支持。结果表明：腋芽诱导的最佳培养基为MS+1.0 mg·L^-1 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）+0.2 mg·L^-1萘乙酸（NAA），2个品种的诱导率都达到100%；最佳丛生芽增殖培养基为MS+0.1mg·L^-1 NAA+0.5mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1氯吡苯脲（CPPU），其中品种“Red Sprite”的增殖系数达5.7，“Winter Gold”的增殖系数为4.5；最佳壮苗培养基为“Red Sprite”为MS+0.1 mg·L^-1NAA+0.5 mg·L^-1 6-BA+1.0 mg·L^-1噻苯隆（thifenolone，TDZ）+1.0 mg·L^-1赤霉素（GA），培养25天时苗高达6.8 cm，“Winter Gold”的为MS+0.1 mg·L^-1 NAA+0.5mg·L^-1 6-BA+0.05mg·L^-1 TDZ+1.0 mg·L^-1GA，25天时苗高达4.4 cm；最佳生根诱导培养基为1/2MS+0.4 mg·L^-1 NAA+0.4 mg·L^-1吲哚丁酸（IBA）+1.0 g·L^-1活性炭（AC），“Red Sprite”品种生根率达95.0%，“Winter Gold”的生根率达97.0%；最佳移栽基质为泥炭土∶珍珠岩=3∶2，“Red Sprite”成活率为95.7%，“Winter Gold”的96.8%。

关键词: 北美冬青，品种“Red Sprite”, 品种“Winter Gold”, 组织培养, 高效再生体系

Abstract:

An efficient and rapid micro-propagation system using tissue culture for two new varieties “Red Sprite” and “Winter Gold” of Ilex verticillata L. was established with the young shoots as explants， and an optimum method produced large numbers of genetically uniform seedlings and maintained its excellent character for I.verticillata L was offered. The optimal medium for axillary bud induction was MS+1.0 mg·L^-1 6-BA+0.2 mg·L^-1 NAA， and the induction rate of both varieties were 100% respectively. The preferred medium for cluster bud proliferation was MS+0.1 mg·L^-1 NAA+0.5 mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1 CPPU. The highest proliferation coefficient was 5.7 for “Red Sprite”， and 4.5 for “Winter Gold” for 25 d culturing respectively. The optimal seedling medium for “Red Sprite” was MS+0.1 mg·L^-1 NAA+0.5 mg·L^-1 6-BA+1.0 mg·L^-1 TDZ+1.0 mg·L^-1 GA， and that of “Winter Gold” was MS+0.1 mg·L^-1 NAA+0.5 mg·L^-1 6-BA+0.05 mg·L^-1 TDZ+1.0 mg·L^-1 GA， the seedling height was up to 6.80 and 4.38 cm respectively. The optimal rooting induction medium was 1/2MS+0.4 mg·L^-1 NAA+0.4 mg·L^-1 IBA+1.0 mg?L^-1 activated carbon， the rooting rate of “Red Sprite” and “Winter Gold” were 95.0%， or 97.0% respectively. The best transplanting substrates were peat∶perlite=3∶2， with a survival rate of 95.7% for “Red Sprite” and 96.8% for “Winter Gold” respectively.

Key words: Ilex verticillata L., varieties of “Red Sprite”, varieties of “Winter Gold”, micropropagation, an efficient regeneration protocol

中图分类号:

刘瑞, 张嘉仪, 葛超奇, 谢露露, 陈颖, 张粲, 陈茜. 2个北美冬青新品种组培快繁高效再生技术体系的建立[J]. 植物研究, 2021, 41(2): 221-231.

Rui LIU, Jia-Yi ZHANG, Chao-Qi GE, Lu-Lu XIE, Ying CHEN, Can ZHANG, Xi CHEN. Establishing an Efficient Regeneration Protocol in vitro for Rapid Micro-propagation of Two New Varieties of Ilex verticillata L.[J]. Bulletin of Botanical Research, 2021, 41(2): 221-231.

图/表 9

表1

表2

图1

表3

表4

表5

图2

表6

表7

参考文献 25

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编号 No.	品种 Variety	6-BA (mg·L^-1)	NAA (mg·L^-1)	CPPU (mg·L^-1)	芽数(个)/瓶 Shoots of per bottle	增殖系数 Proliferation coefficient
1	“Red Sprite”	0.1	0.1	0.0	21.0±2.6d	2.7±0.1c
2		0.1	0.5	0.5	27.7±2.5c	3.3±0.2c
3		0.1	1.0	1.0	40.7±2.1b	4.2±0.2b
4		0.5	0.1	0.5	57.0±2.6a	5.7±0.3a
5		0.5	0.5	1.0	42.3±1.5b	4.8±0.5b
6		0.5	1.0	0.0	27.3±2.1c	3.2±0.4c
7		1.0	0.1	1.0	30.0±1.7c	4.3±0.7b
8		1.0	0.5	0.0	32.0±1.0cd	4.3±0.2b
9		1.0	1.0	0.5	28.7±1.5c	3.2±0.2c
水平1平均Average of level 1		3.4	4.23	3.4
水平2平均Average of level 2		4.57	4.13	4.07
水平3平均Average of level 3		3.93	3.53	4.4
极差Range(R)		1.17	0.7	1.03
10	“Winter Gold”	0.1	0.1	0.0	9.0±1.0cd	1.1±0.0e
11		0.1	0.5	0.5	9.0±1.0cd	1.5±0.3d
12		0.1	1.0	1.0	17.7±0.4b	2.9±0.3b
13		0.5	0.1	0.5	28.3±1.54a	4.5±0.4a
14		0.5	0.5	1.0	18.0±0.8b	3.0±0.3b
15		0.5	1.0	0.0	8.0±1.0d	1.8±0.3c
16		1.0	0.1	1.0	29.0±1.0a	3.5±0.3b
17		1.0	0.5	0.0	9.3±0.6cd	1.4±0.1d
18		1.0	1.0	0.5	6.7±0.6e	1.3±0.1d
水平1平均Average of level 1		1.83	3.03	1.43
水平2平均Average of level 2		3.10	1.97	2.43
水平3平均Average of level 3		2.07	2.00	3.13
极差Range(R)		1.27	1.07	1.70

编号 No.	品种 Variety	TDZ (mg·L^-1)	GA (mg·L^-1)	苗高 High of shoot(cm)	增殖系数 Proliferation coefficient	生长状况 Growth states
1	“Red Sprite”	0.05	1.0	5.8±0.6b	3.4±0.5c	茎干略有增粗和伸长，叶尖略有枯黄，部分叶片明显枯黄 The stems in the treatment were slightly thickening and elongation,the leaf tip or whole leaves obviously yellowed
2		0.25	1.0	5.4±0.8b	3.0±0.5c	茎干略有增粗和伸长，叶尖略有枯黄 The stems in the treatment were slightly thickening and elongation,the leaf tip slightly yellowed
3		0.50	1.0	6.2±0.6ab	4.1±0.6b	茎干的增粗和伸长较为明显，叶片鲜绿 The stems in the treatment were observed significant thickening and elongation,the leaves were observed bright green
4		1.00	1.0	6.8±0.7a	4.6±0.3a	茎干明显增粗和伸长，叶片浓绿，新生叶片多于前3种 The stems in the treatment were significantly thickening and elongation,and more leaves than the first three teatments, leaves were thick green
5	“Winter Gold”	0.05	1.0	4.4±0.7a	3.1±0.4a	茎干明显增粗和伸长，叶片鲜绿 The stems in the treatment were observed significant thickening and elongation,the leaves were observed bright green
6		0.25	1.0	3.7±0.1b	1.9±0.3b	茎干略有增粗，伸长明显，叶片鲜绿 The stems in the treatment were observed significant thickening and elongation,the leaves were observed bright green
7		0.50	1.0	3.5±0.2b	1.8±0.4b	茎干明显增粗，无明显伸长，叶缘发黄 The stems in the treatment were observed significant thickening, but not significant elongation, the leaf tip slightly yellowed
8		1.00	1.0	3.4±0.3b	1.6±0.2b	茎干无明显增粗和伸长，叶缘发红 The stems in the treatment were observed no significant thickening and elongation,the leaf tip slightly reded

编号 No.	品种 Variety	NAA (mg·L^-1)	AC (g·L^-1)	IBA (mg·L^-1)	芽苗高度 High of shoot(cm)	根数(条) Roots number	生根率 Rate of rooting(%)
1	“Red Sprite”	0.4	0.0	0.0	3.1±0.3d	4.0±1.4d	25.0e
2		0.4	0.5	0.0	2.9±0.5d	2.9±0.8e	66.7cd
3		0.4	1.0	0.0	4.3±0.4cd	6.3±0.9bc	66.7cd
4		0.4	2.0	0.0	2.6±0.5e	3.4±0.9d	56.4d
5		0.1	1.0	0.0	4.6±0.2c	6.9±1.2bc	75.0c
6		1.0	1.0	0.0	4.0±0.4cd	3.8±0.5d	50.0d
7		0.0	1.0	0.1	2.8±0.1de	11.3±1.0a	48.3d
8		0.0	1.0	0.4	3.0±0.3d	5.7±0.6c	56.7d
9		0.0	1.0	1.0	2.8±0.2d	4.7±0.6d	75.7c
10		0.4	1.0	0.4	5.5±1.0b	7.0±1.6bc	95.0a
11		0.1	1.0	1.0	6.6±1.0a	3.5±0.6d	80.0b
12		1.0	1.0	1.0	3.6±0.8cd	8.6±1.1b	100.0a

编号 No.	品种 variety	NAA (mg·L^-1)	AC (g·L^-1)	IBA (mg·L^-1)	芽苗高度 High of shoot(cm)	根数(条) Number of root	生根率 Rate of rooting(%)
1	“Winter Gold”	0.4	0	0	2.0±0.1d	1.8±0.3e	25.0e
2		0	1.0	0.1	3.8±0.3c	11.8±0.9a	33.3e
3		0	1.0	0.4	4.2±0.2b	9.9±1.6b	66.7c
4		0	1.0	1.0	4.0±0.4b	9.3±1.8b	69.2c
5		0.1	1.0	0	3.3±0.3c	3.5±0.6d	50.0d
6		0.4	1.0	0	5.2±0.5a	7.0±1.3c	87.5b
7		1.0	1.0	0	3.1±0.1c	3.8±0.5d	50.0d
8		0.4	1.0	0.4	5.0±1.4a	7.0±1.4c	97.0a
9		0.1	1.0	0.4	4.9±1.2a	5.5±0.6d	90.0b
10		1.0	1.0	1.0	3.9±0.9b	9.0±1.2b	67.0c

编号 No.	品种 Variety	栽培基质 Media	移栽成活率 Rate of survival(%)
1	“Red Sprite”	泥炭土∶花园土∶珍珠岩∶蛭石=3∶1∶3∶3 Peat∶garden soil∶perlite=3∶1∶3∶3	82.7±5.9b
2		泥炭土∶花园土∶珍珠岩∶蛭石=4∶1∶2∶3 Peat∶garden soil∶perlite∶vermiculite=4∶1∶2∶3	85.7±6.8a
3		泥炭土∶花园土∶珍珠岩∶蛭石=5∶1∶1∶3 Peat∶garden soil∶perlite∶vermiculite=5∶1∶1∶3	73.3±4.0c
4		泥炭土∶花园土∶珍珠岩=3∶1∶2 Peat∶garden soil∶perlite=3∶1∶2	92.3±5.1b
5		泥炭∶珍珠岩=3∶2 Peat∶perlite=3∶2	95.7±3.2b
6	“Winter Gold”	泥炭土∶花园土∶珍珠岩∶蛭石=3∶1∶3∶3 Peat∶garden soil∶perlite∶vermiculite=3∶1∶3∶3	74.3±2.9b
7		泥炭土∶花园土∶珍珠岩∶蛭石=4∶1∶2∶3 Peat∶garden soil∶perlite∶vermiculite=4∶1∶2∶3	80.0±2.1a
8		泥炭土∶花园土∶珍珠岩∶蛭石=5∶1∶1∶3 Peat∶garden soil∶perlite∶vermiculite=5∶1∶1∶3	63.3±43.c
9		泥炭土∶花园土∶珍珠岩=3∶1∶2 Peat∶garden soil∶perlite=3∶1∶2	88.2±6.1b
10		泥炭土∶珍珠岩=3∶2 Peat∶perlite=3∶2	96.8±3.1b

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编号 No.	品种 Variety	6-BA (mg·L^-1)	NAA (mg·L^-1)	IBA (mg·L^-1)	新梢长度 Length of new shoots(cm)	诱导率 Rate of induction（%）
1	“Red Sprite”	0.5	0.0	0.2	1.5±0.9a	91.7b
2		0.5	0.0	0.5	1.0±0.4ab	83.3c
3		0.5	0.2	0.0	1.2±0.6ab	100.0a
4		0.5	0.5	0.0	0.9±0.3b	66.7d
5		1.0	0.0	0.2	1.3±0.4ab	83.0c
6		1.0	0.0	0.5	1.2±0.6ab	100.0a
7		1.0	0.2	0.0	1.3±0.6ab	100.0a
8		1.0	0.5	0.0	0.9±0.5ab	100.0a
9	“Winter Gold”	0.5	0.0	0.2	1.3±1.0bc	85.1b
10		0.5	0.0	0.5	1.0±0.5c	83.3c
11		0.5	0.2	0.0	1.1±0.7c	100.0a
12		0.5	0.5	0.0	1.5±0.8ab	100.0a
13		1.0	0.0	0.2	1.2±0.5bc	83.0c
14		1.0	0.0	0.5	1.0±0.3c	100.0a
15		1.0	0.2	0.0	1.7±0.6a	100.0a
16		1.0	0.5	0.0	1.3±0.5bc	100.0a

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