植物研究 ›› 2008, Vol. 28 ›› Issue (3): 304-309.doi: 10.7525/j.issn.1673-5102.2008.03.013
莫鹏巧1;黄玉源2*;钟晓青3;刘广林4;李正文1;农保选4
MO Peng-Qiao;HUANG Yu-Yuan*;ZHONG Xiao-Qing;LIU Guang-Lin;LI Zheng-Wen;NONG Bao-Xuan
摘要: 比较CTAB法和SDS法提取叉叶苏铁(Cycas micholitzii)的总DNA,发现CTAB法是提取叉叶苏铁总DNA的较好方法;对叉叶苏铁ISSR-PCR反应体系中的4个主要因素dNTPs,Taq DNA聚合酶,引物及Mg2+进行最优条件筛选;采用单因素法探讨DNA模板量、退火温度和循环次数的最佳反应条件,建立了适合于叉叶苏铁的最佳ISSR-PCR反应体系 (20 μL体系): 1×Buffer,75 ng DNA模板,dNTPs 250 μmol·L-1, Taq酶1.0U,引物0.2 μmol·L-1,Mg2+ 2.5mmol·L-1,反应程序为:94℃预变性5 min,94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸2 min,循环40次,72℃延伸10 min,4℃保存。本研究结果为苏铁纲植物的分子生物学和分子系统学研究提供理论参考。
中图分类号: