%0 Journal Article %A 2 %A 陈清1 %A 江雷雨1 %A 汤浩茹1* %A 王小蓉1 %A 王燕1 %A 朱芳莉1 %T 黑莓果实UGT78H2重组蛋白诱导的响应面优化与蛋白纯化 %D 2015 %R 10.7525/j.issn.1673-5102.2015.05.014 %J 植物研究 %P 724-729 %V 35 %N 5 %X UGT78H2是从黑莓果实中新发现的一个植物糖基转移酶家族成员,获得重组蛋白是后续深入研究该基因功能的基础。本研究通过构建原核表达载体,并应用响应面分析方法对重组蛋白的诱导条件(如诱导温度、IPTG浓度、菌液浓度和诱导时间)进行了优化,结果表明:(1)构建了pET32a-UGT78H2原核表达载体,并成功导入到BL21(DE3)pLysS细菌中;(2)经响应面优化,在29.5℃培养工程菌至菌液OD600=0.51,加入终浓度为0.4 mmol·L-1的IPTG诱导7.4 h,可获得最大量重组蛋白166.4 μg·mL-1(占总蛋白41.6%);(3)诱导时间和培养温度极显著地影响重组蛋白表达量,诱导剂IPTG和诱导前菌液浓度之间的交互效应显著影响重组蛋白的表达;(4)获得的带S-tag和His-tag的UGT78H2重组蛋白分子量为67.9 kDa,主要以包涵体形式存在,通过Ni-NTA柱纯化,成功获得了重组蛋白。以上结果为进一步采用酶学方法进行UGT78H2蛋白功能鉴定提供了基础资料。 %U https://bbr.nefu.edu.cn/CN/10.7525/j.issn.1673-5102.2015.05.014