TMV复制酶基因靶向的RNA干涉载体构建

doi:10.7525/j.issn.1673-5102.2008.03.014

植物研究 ›› 2008, Vol. 28 ›› Issue (3): 310-314.doi: 10.7525/j.issn.1673-5102.2008.03.014

TMV复制酶基因靶向的RNA干涉载体构建

律凤霞^1,3;郭兆奎^1,2;颜培强²;万秀清²;潘永明³

(1.黑龙江八一农垦大学植物科技学院，大庆　163000) (2.黑龙江省烟草科学研究所，牡丹江　157011) (3.牡丹江师范学院生物系，牡丹江　157012)

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-05-20 发布日期:2008-05-20
基金资助:

Construction of TMV-replicase Gene-targeted Vectoer for RNA Interference

LÜFeng-Xia;GUO Zhao-Kui;YAN Pei-Qiang;WAN Xiu-Qing;PAN Yong-Ming

(1.Heilongjiang August First Land reclamation university,Daqing　163000) (2.Heilongjiang Tobacco Research Institute,Mudanjiang　157011) (3.Mudanjiang Normal university College,Mudanjiang　157012)

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2008-05-20 Published:2008-05-20
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摘要/Abstract

摘要： 以TMV复制酶基因作为RNAi的靶向序列，应用RT－PCR法获得目的DNA序列。依据RNAi机制，以酶切后连接的方法将目的DNA序列正向、反向锚定连接到pUCCRNAi载体质粒，构建含目的序列反向重复结构的RNA干涉中间载体；反向重复结构酶切后插入含超强启动子的pC2300-35s-OCS表达载体，重组的表达载体质粒经冻融法转化到只含辅助质粒的根癌农杆菌中，完成双元载体系统的构建。每步的重组子经特异引物PCR验证和酶切验证有相应的特异条带存在，且测序鉴定序列正确。确认成功构建了TMV复制酶基因靶向的RNAi双元载体，为RNAi技术在植物病毒病害防治中的应用奠定基础。

关键词: TMV复制酶基因, RNA干涉, 载体构建

Abstract: The TMV-replicase gene was regarded target-directed sequence for RNA interference in this paper. The target sequence was linked to pMD18-T Simple Vector and replicated in E.coli DH 5α. after obtained by RT-PCR reaction. The pMD18-T Simple vector (which contains target sequence) was digested restrictively by double-endonuclease, after purifying the digested product was inserted into pUCCRNAi vector by the counterrepeat way. Then the counterrepeated structure of target sequence was inserted into pC2300-35s-OCS expression vector after enzyme disgested. The recombination plamid was transferred into Agrobacterium tumefaciens which only contained assistant plasmid in order to construct double-plasmid expression vector. With PCR reaction and restriction endonuclease digestion, the target gene sequence was comfirmed in engineering-bacterium.

Key words: TMV-replicase gene, RNA interference, vectoer construction

中图分类号:

Q949

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TMV复制酶基因靶向的RNA干涉载体构建

Construction of TMV-replicase Gene-targeted Vectoer for RNA Interference

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